определение количества аскорбиновой кислоты

0,82 Mb.НазваниеЛабораторная работа «Электрометрическое определение водородного показателя» Лабораторная работа «Индикаторный метод измерения водородного показателя»страница10/11Дата конвертации20.11.2012Размер0,82 Mb.Тип                   10   6 ВИТАМИНЫ Витамины ЂЂЂ важнейший класс незаменимых биологически активных веществ. Организм человека и животных не синтезирует витамины или синтезирует их в недостаточном количестве. В отличие от других незаменимых веществ (аминокислоты и жирные кислоты) витамины не являются пластическим материалом или источником энергии и участвуют в обмене веществ преимущественно как коферменты при биокатализе и регуляторы биохимических и физиологических процессов (Приложение Н). 6.1 Лабораторная работа «Реакция окисления тиамина в тиохром» Принцип реакции. Витамин В1 в щелочной среде под действием гексоциано-III феррата калия окисляется в тиохром ЂЂЂ пигмент жел]того цвета, который в изобутиловом спирте дает интенсивно синюю флюоресценцию: Материалы и реактивы: тиамин в концентрации 5 мкг в 1 мл; 1 %-ный раствор K3Fe(CN)6; 30 %-ный раствор NaOH; изобутиловый спирт. Оборудование: источник ультрафиолетового излучения (флюороскоп), штатив с пробирками, пипетки. Ход работы. К 1 мл раствора витамина В1 прибавляют 2 мл смеси (1 мл раствора K3Fe(CN)6 и 1 мл раствора NaOH), тщательно перемешивают и оставляют на три минуты. Затем прибавляют 5 мл изобутилового спирта, энергично и равномерно встряхивают в те]чение 2 мин. Изобутиловый экстракт тиохрома в ультрафиоле]товых лучах имеет интенсивную синюю флюоресценцию. Это очень чувствительная специфическая реакция. 6.2 Лабораторная работа «Реакция восстановления рибофлавина (витамина В2)»Образующийся при добавлении металлического цинка к концентрированной соляной кислоте водород восстанавливает желтый рибофлавин сначала в родофлавин (промежуточное соединение) красного цвета, а затем в бесцветный лейкофлавин: Материалы и реактивы: концентрированная HCl; металлический цинк; 0,025 %-ный раствор витамина B2 (эмульсия рибофлавина в воде). Оборудование: пробирки, пипетки. Ход работы. В пробирку приливают 1 мл раствора витамина В2, 0,5 мл концентрированной соляной кислоты и опускают кусочек металлического цинка. Выделяющийся водород реагирует с рибофлавином, восстанавливая его, и жидкость постепенно окрашивается в розовый цвет, а затем обесцвечивается. При взбалтывании обесцвеченного раствора лейкофлавин вновь окисляется кислородом воздуха в рибофлавин.6.3 Лабораторная работа «Реакция на пиридоксин (витамин В6) с хлоридом железа (III)»При взаимодействии пиридоксина с раствором хлорида железа жидкость окрашивается в красный цвет вследствие образования комплексной соли типа фенолята железа. Материалы и реактивы: водный 1 %-ный раствор витамина В6; 1 %-ный раствор FeCl3. Оборудование: пробирки, пипетки. Ход работы. В пробирке смешивают 1 мл водного раствора пиридоксина и 2 капли раствора хлорида железа. Смесь встряхивают. Наблюдают окрашивание жидкости в красный цвет.6.4 Лабораторная работа «Выделение фолиевой кислоты из дрожжей и ее обнаружение»Фолиевая кислота хорошо растворима в 0,1 моль/л растворе NaOH. При экстрагировании фолиевой кислоты из дрожжей и ультрафиолетовом облучении наблюдается ее интенсивная голубая флюоресценция. Материалы и реактивы: дрожжи пищевые; ледяная уксусная кислота; 0,4 %-ный раствор перманганата калия; 3 %-ный раствор пероксида водорода; 0,1 моль/л и 0,005 моль/л растворы гидроксида натрия; индикаторная бумага; кварцевый песок. Оборудование: центрифуга, флюороскоп, центрифужные пробирки, ступка с пестиком, пипетки. Ход работы. В ступку помещают 10 г дрожжей, прибавляют 10 мл 0,1 моль/л раствора NaOH, 2 г кварцевого песка и растирают в течение 5 мин. Затем центрифугируют в течение 15 мин при скорости 800 об/мин. К 10 каплям надосадочной жидкости приливают 20 капель ледяной уксусной кислоты (pH=3,0) и 10 капель раствора KMnO4 так, чтобы розовая окраска не исчезала в течение 10 мин (при её исчезновении следует прилить ещё несколько капель KMnO4). Через 10 мин избыток перманганата калия удаляют путем добавления 4ЂЂЂ5 капель раствора H2O2 и приливают 0,005 моль/л раствора NaOH (около 5 мл) до pH 4,0ЂЂЂ4,5 (в присутствии индикатора). При ультрафиолетовом облучении фолиевой кислоты в щелочном растворе в флюороскопе наблюдается интенсивная голубая флюоресценция.6.5 Реакции на аскорбиновую кислоту (витамин С) 6.5.1 Лабораторная работа «Качественные реакции на витамин С» Аскорбиновая кислота способна легко вступать в окислительно-восстановительные реакции и восстанавливать 2,6-дихлорфенолиндо-фенол, гексоциано-(III)-феррат калия, нитрат серебра, метиленовый синий. При этом окисленные формы 2,6-дихлорфенолиндофенола (синий цвет) и метиленового синего восстанавливаются в бесцветные лейкосоединения, а K3Fe(CN)6 восстанавливается до K4Fe(CN)6, который с ионами валентного железа дает соль Fe[Fe(CN)6]3 синего или зеленого цвета. Реакция восстановления метиленового синего происходит по уравнению:Материалы и реактивы: 0,1 %-ный раствор 2,6-дихлорфенол-индофенола; 10 %-ный раствор аскорбиновой кислоты; 0,01 %-ный раствор метиленового синего; 10 %-ный раствор Na2CO3; 1 %-ный раствор K3Fe(CN)6; 1 %-ный раствор FeCl3. Оборудование: штатив с пробирками, капельницы, пипетки, термостат. Ход работы. Для проведения реакции с 2,6-дихлорфенолиндофе-нолом в пробирку вносят 0,5 мл раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, 1ЂЂЂ2 капли раствора HCl и каплями раствор аскорбиновой кислоты. Раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола обесцвечивается. Для проведения реакции с метиленовым синим в две пробирки вносят по одной капле раствора метиленовой сини и по одной капле раствора бикарбоната натрия. В первую вливают пять капель раствора аскорбиновой кислоты, во вторую ЂЂЂ пять капель воды и ставят обе пробирки в термостат при температуре от 37 до 40 `С. Через некоторое время в пробирке с раствором аскорбиновой кислоты жидкость обесцвечивается. Для реакции с гексациано-(III)-ферратом калия к 1 мл раствора аскорбиновой кислоты прибавляют 1 мл раствора K3Fe(CN)6 и 0,5 мл раствора FeCl3. Наблюдают образование сине-зеленого окрашивания. 6.5.2 Лабораторная работа «Количественное определение витамина С по Тильмансу» Метод количественного определения аскорбиновой кислоты основан на ее способности окисляться 2,6-дих

6 ВИТАМИНЫ - Лабораторная работа «Электрометрическое определение водородного показателя» Лабораторная работа «Индикаторный...